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細胞簡介：

大鼠Ⅱ型肺泡上皮分離自肺組織；肺泡由單層上皮細胞構成的半球狀囊泡。肺中的支氣管經多次反復分枝成無數細支氣管，它們的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即為肺泡。小肺泡細胞，又稱I型肺泡細胞，厚約0.1微米，基底部是基底膜，無增殖能力。大肺泡細胞，又稱Ⅱ型肺泡細胞，分泌表面活性物質（二棕櫚酰），以降低肺泡表面張力。Ⅱ型肺泡細胞位于Ⅰ型肺泡細胞之間，數量較Ⅰ型肺泡細胞多，但覆蓋面積比Ⅰ型肺泡細胞小。細胞立方形或圓形,頂端突入肺泡腔。細胞核圓形，胞質著色淺、呈泡沫狀。電鏡下，細胞游離而有少量微絨毛，胞質內富含線粒體和溶酶體，有較發達的粗面內質網和高爾基復合體。核上方有較多的分泌顆粒，電子密度高、大小不等，直徑約0.1-1.0μm顆粒內含有平行排列的板層狀結構，稱為嗜餓性板層小體。小體內的主要成分為磷脂，以二棕櫚酰為主，此外還有糖胺多糖及蛋白質等。顆粒內物質釋放出來后，在肺泡表面形成一層粘液層，稱為表面活性物質（surfactant）。表面活性物質有降低肺泡表面張力、穩定肺泡大小的作用。呼氣時肺泡縮小，表面活性物質密度增加，表面張力降低，防止肺泡過度塌陷；吸氣時肺泡擴張，表面活性物質密度減小，肺泡回縮力加大，可防止肺泡過度膨脹。表面活性物質的缺乏或變性均可引起肺不張，過度通氣可造成表面活性物質缺乏；吸入毒氣可直接破壞表面活性物質。Ⅱ型肺泡細胞有分裂、增殖并分化為Ⅰ型肺泡細胞的潛能，故具有修復受損傷上皮的作用。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠Ⅱ型肺泡上皮采用彈性蛋白酶灌注消化法結合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠Ⅱ型肺泡上皮經SP-C免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產品：

小鼠血管緊張素 I (mouse ANG I)   作用：   ELISA   規格：   96T   美國 Phoenix

小鼠血管緊張素 II (mouse ANG II)   作用：   ELISA   規格：   96T   美國 Phoenix

mouse CD 40L ELISA Kit   作用：   ELISA   規格：   96T   奧地利 Bender

大鼠 C 反應蛋白 (rat CRP)   作用：   ELISA   規格：   96T   美國 ADI

小鼠仙臺病毒(Sendai)試劑盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein 4 (BMP-4) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)試劑盒

Humanproteinase-aineuophilcytoplasmicaibody,PR3-ANCAELISAKit 人蛋白酶3特異性抗中性粒細胞胞質抗體(PR3-ANCA)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Chickenheparansulfate,HS試劑盒雞類肝素(HS)試劑盒規格：96T/48T

載玻片細胞CDK4蛋白表達熒光顯微鏡試劑盒10/20次

MouseHeatShockProtein70,Hsp-70ELISAKit小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)試劑盒規格：96T/48T

CCL2重組小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

1α(MEP1α)重組蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

RIOK1重組人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

CDC37 Protein Human 重組人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 標簽)

IgG Protein Rabbit 重組兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

1α(MEP1α)重組蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

CDC37 Protein Human 重組人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 標簽)

CCL2重組小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

IgG Protein Rabbit 重組兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

RIOK1重組人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞豬組織因子(TF)ELISA 試劑盒

Peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPAR- alpha) ELISA Kit 人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)試劑盒

Rabbitalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit 兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforApo-H(HumanApolipoproteinH)ELISAKit人載脂蛋白H

溴脫氧尿核苷(BrdU)溶液(100毫摩爾)1毫升

Porcinemyelinbasicprotein,MBPELISAKit豬髓0脂堿性蛋白(MBP)試劑盒規格：96T/48T

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。