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實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠牙胚分離自牙胚組織；牙胚是牙齒開始發育階段的形態，是由牙板向深層的結締組織內伸延，在其末端細胞增生，進一步發育成牙胚。牙胚有三部分組成：①成釉器（enamel organ），起源于口腔外胚層，形成釉質；②牙乳頭（dental papilla），起源于外胚層間充質，形成牙髓和牙本質；③牙囊（dental sac），起源于外胚層間充質，形成牙骨質、牙周膜和固有牙槽骨。牙胚的發生是口腔上皮和外胚間充質相互作用的結果。在胚胎的第5周，覆蓋在原口腔的上皮由兩層細胞組成，外層是扁平上皮細胞，內層為矮柱狀的基底細胞。在未來的牙槽突區，深層的外胚層間充組織誘導上皮增生，開始僅在上下頜弓的特定點上，上皮局部增生，很快增厚的上皮相互連接，依照頜骨的外形形成一馬蹄形上皮帶，稱為原發性上皮帶。在胚胎的第7周，這一上皮帶繼續向深層生長，并分裂為兩個：向頰（唇）方向生長的上皮板稱前庭板，位于舌（腭）側的上皮板稱為牙板（dental lamina）。在胚胎的第8~10周，前庭板繼續向深層生長，與發育的牙槽嵴分開，前庭板表面上皮變性，形成口腔前庭溝。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠牙胚采用膠原酶消化法制備而來制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠牙胚經檢測，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形、多角形

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

大鼠胸腎表達趨化因子(BRAK)檢測試劑盒 ，英文名： BRAK ELISA Kit

Pla gibberellic acid (GA) ELISA Kit 植物赤霉素(GA)檢測試劑盒

MouseCollageypeⅢ,ColⅢELISAKIT 小鼠Ⅲ型膠原(ColⅢ)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanAi-ThrombinIII,AT-IIIELISAKit人抗Ⅲ抗體

細胞FES激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitBigET大鼠大內皮素

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GH1重組人 GH1 / Growth hormone 1 蛋白 Protein

CD69 Protein Human 重組人 CD69 蛋白

Spike Protein SARS 重組SARS Spike 蛋白 (Receptor Binding Domain, His 標簽)

性激素結合球蛋白(SHBG)重組蛋白 Recombinant Sex Hormone Binding Globulin (SHBG)

CD69 Protein Human 重組人 CD69 蛋白

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Spike Protein SARS 重組SARS Spike 蛋白 (Receptor Binding Domain, His 標簽)

GH1重組人 GH1 / Growth hormone 1 蛋白 Protein

小鼠性激素結合球蛋白(SHBG)ELISA 試劑盒 96T/48T

Hei Amy Ba aigen ELISA Kit 人痢疾內阿米巴抗原檢測試劑盒

Humanprostacycline,PGIELISAKit 人前列環素(PGI)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Chickenadrenomedullin,ADM檢測試劑盒雞腎上腺髓質素(ADM)檢測試劑盒規格：96T/48T

載玻片細胞AKT蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseHya]uronatebindingprotein,HABPELISAKit小鼠透明質酸結合蛋白(HABP)檢測試劑盒規格：96T/48T

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小鼠血栓前體蛋白檢測試劑盒   小鼠血栓前體蛋白試劑盒   規格型號：96T/48T   小鼠血栓前體蛋白試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠血栓前體蛋白試劑盒、小鼠血栓前體蛋白檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

小鼠血清總補體檢測試劑盒   小鼠血清總補體試劑盒   規格型號：96T/48T   小鼠血清總補體試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠血清總補體試劑盒、小鼠血清總補體檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

小鼠血清淀粉樣蛋白檢測試劑盒   小鼠血清淀粉樣蛋白試劑盒   規格型號：96T/48T   小鼠血清淀粉樣蛋白試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠血清淀粉樣蛋白試劑盒、小鼠血清淀粉樣蛋白檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。