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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人支氣管平滑肌分離自支氣管組織；支氣管（Bronchi），是指由支氣管分出的各級(jí)分枝，由支氣管分出的一級(jí)支氣管，即左、右主支氣管。左主支氣管與右主支氣管相比較，前者較細(xì)長，走向傾斜；后者較粗短，走向較前者略直，所以經(jīng)支氣管墮入的異物多進(jìn)入右主支氣管。支氣管和支氣管還有以區(qū)別就是，支氣管是以“C"型的支氣管軟骨為支架，而支氣管不是。支氣管平滑肌細(xì)胞主要功能：①支氣管平滑肌細(xì)胞能維持支氣管張力，保持支氣管形態(tài)；②支氣管平滑肌特異的超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和調(diào)節(jié)機(jī)制是支氣管正常生理功能的基礎(chǔ)；③支氣管平滑肌通過分泌細(xì)胞因子和趨化因子等促炎介質(zhì)，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能。支氣管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人支氣管平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人支氣管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠L選擇素(L-Selectin/CD62L)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

小鼠L苯解酶(PAL)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

小鼠KN-62試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

小鼠I型膠原蛋白（COL-1）試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

小鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA 試劑盒

Rat annexin V (ANX- V) ELISA Kit 大鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)試劑盒

Humansecretieceptor,SRELISAKit 人促胰液素/分泌素受體(SR)試劑盒 進(jìn)口分裝

Humanai-Reticulinaibody,ARA試劑盒人抗網(wǎng)硬蛋白抗體(ARA)試劑盒

植物細(xì)胞原生質(zhì)體電轉(zhuǎn)試劑盒10次

HumaumornecrosisfactorsolublereceptorⅡ,TNFsR-ⅡELISAKit人壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)試劑盒

CSF1R重組大鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

DBH (Dopamine- Beta-Hydroxylase 0.5mgDBH (Dopamine- Beta-Hydroxylase) 多巴胺β羥化酶(抗原)

FABP3重組人 FABP3 / H-FABP / M-FABP 蛋白 Protein

FAM3B Protein Human 重組人 FAM3B 蛋白

TIMD4 Protein Mouse 重組小鼠 TIM4 / TIMD4 蛋白 (His 標(biāo)簽)

DBH (Dopamine- Beta-Hydroxylase 0.5mgDBH (Dopamine- Beta-Hydroxylase) 多巴胺β羥化酶(抗原)

FAM3B Protein Human 重組人 FAM3B 蛋白

CSF1R重組大鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

TIMD4 Protein Mouse 重組小鼠 TIM4 / TIMD4 蛋白 (His 標(biāo)簽)

FABP3重組人 FABP3 / H-FABP / M-FABP 蛋白 Protein

人支氣管平滑肌細(xì)胞大鼠葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3(GL3)試劑盒 ，英文名： GL3 ELISA Kit

Mouse heme oxygenase 1 (HO-1) ELISA Kit 小鼠血紅素氧合酶1(HO-1)試劑盒

Ratlipoprotein-associatedphospholipaseA2,Lp-PL-A2ELISAKit 大鼠脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforGP-MM(MouseGlycogenphosphorylaseMM)ELISAKit小鼠糖原0酸化酶同工酶MM

細(xì)胞蛋酸酶2A(PP2A)活性比色法定量試劑盒20次(10個(gè)樣本)

RatToll-likereceptor9,TLR-9ELISAKit大鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289)試劑盒

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。